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比例稀释后用于RNA的提取。棉拭子病料直接加入1毫升磷酸盐缓冲液，混合后取溶液用于RNA的提取，不需要稀释。④RNA的提取直接会影响到反转录？聚合酶链式反应的检查结果，需要特别注意提取过程的操作。⑤注意废弃物的无害化处理，可疑待检样品及其接触过的器材要消毒灭菌，防止实验室散毒；含有或沾有溴化乙锭（EB）的物品需要高温处理。注意防止操作过程中的环境污染，有条件的情况下可以使用独立房间分别进行各环节的操作，无条件时则应尽可能划分不同功能的工作区，并且电泳时要采用单独的移液器。⑥剩余的试剂及空瓶不能随意丢弃，须经加热或消毒灭菌后方可废弃。
【贮藏与有效期】 RNA提取试液应置于2℃～8℃条件下保存，反转录？聚合酶链式反应体系置于…20℃以下条件下保存，有效期均为6个月。
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二、禽流感病毒5亚型血凝抑制试验抗原与阴性、阳性血清（）
【主要成分】 抗原为灭活的H5亚型禽流感病毒，血凝抑制效价≥7log2。阳性血清为SPF鸡感染禽流感病毒H5亚型制备的高免血清，血凝抑制效价≥7log2。阴性血清为无特定病原鸡血清。
【物理性状】 抗原为白色或淡黄色海绵状疏松团块，阳性血清和阴性血清为微黄色或淡红色海绵状疏松团块，易与瓶壁脱离，加稀释液后迅速溶解。
【作用与用途】 用于血凝抑制试验检测禽流感病毒H5亚型抗体。
【用法】
准备的材料：96孔V形（90度）微量反应板、单道及多道微量移液器（配有吸头）、加样槽、吸管、烧杯。
pH值7。2的0。01摩/升磷酸盐缓冲液的配制：①配制25倍磷酸盐缓冲液。称量2。74克磷酸氢二钠和0。79克磷酸二氢钠，加蒸馏水至100毫升。②配制1倍磷酸盐缓冲液。量取40毫升25倍磷酸盐缓冲液，加入8。5克氯化钠，加蒸馏水至1 000毫升，用氢氧化钠或盐酸调pH值至7。2；69千帕高压蒸汽灭菌15分钟或用微孔滤膜过滤除菌。
磷酸盐缓冲液一经使用，于2℃～8℃条件下保存不超过3周。
阿氏（Alsevers）液的配制：称量葡萄糖2。05克、柠檬酸钠0。8克、柠檬酸0。055克、氯化钠0。42克，加蒸馏水至100毫升，加热溶解后调pH值至6。1，69千帕高压蒸汽灭菌15分钟，置于2℃～8℃条件下保存备用。
1％鸡红细胞悬液的配制：采集2～3只SPF公鸡或无禽流感和新城疫等抗体的健康公鸡血液，与等体积阿氏液混合，用pH值7。2的0。01摩/升磷酸盐缓冲液洗涤3次，每次洗涤后均以3 000转/分离心5分钟，之后用磷酸盐缓冲液配成1％红细胞悬液，置于2℃～8℃条件下保存备用。
抗原溶解：冻干的抗原和血清均按瓶签上标注的量，用磷酸盐缓冲液溶解。
【血凝试验及结果判定】 在 V 形微量反应板中，每孔加0。025毫升磷酸盐缓冲液。第一孔加0。025毫升抗原，反复抽打3～5次混匀。从第一孔吸取0。025毫升抗原加入第二孔，混匀后吸取0。025毫升加入第三孔，如此进行对倍稀释至第十一孔，从第十一孔吸取0。025毫升弃去。每孔加0。025毫升磷酸盐缓冲液和0。025毫升1％鸡红细胞悬液。将反应板在振荡器上震荡1～2分钟或轻扣反应板混合反应物，在室温（20℃～25℃）下静置20～30分钟或在2℃～8℃条件下静置45～60分钟。在对照孔红细胞显著呈纽扣状时判定结果。结果判定时将反应板倾斜60°，观察红细胞有无泪珠状流淌，完全无泪珠样流淌（100％凝集）的最高稀释倍数为血凝效价。
【血凝抑制试验及结果判定】 根据血凝试验测定的效价，计算配制4个血凝单位（4HAU）抗原。血凝效价除以4即为含4个血凝单位抗原的稀释倍数。例如，血凝效价为1 ∶ 256，则4个血凝单位抗原的稀释倍数应是1 ∶ 64（256除以4）。第一至第十一孔加入0。025毫升磷酸盐缓冲液，第十二孔加入0。05毫升磷酸盐缓冲液。第一孔加入0。025毫升血清，充分混匀后吸0。025毫升于第二孔，依次倍比稀释至第十孔，从第十孔吸取0。025 毫升弃去。第一至第十一孔均加入0。025毫升4HAU抗原，在室温（20℃～25℃）下静置30分钟或在2℃～8℃条件下静置50分钟。每孔加入0。025 毫升 1％鸡红细胞悬液，振荡混匀，在室温（20℃～25℃）下静置20～30分钟或在2℃～8℃条件下静置45～60分钟，对照红细胞将呈明显的纽扣状沉于孔底。
以完全抑制4HAU抗原的最高血清稀释倍数判为该血清的血凝抑制效价。当阳性对照血清的血凝抑制效价与已知效价误差不超过1个滴度、阴性对照血清效价不高于21og2 时，试验方可成立。被检血清血凝抑制效价≤31og2判为阴性；=41og2判为可疑（可疑样品应重检，重检效价≥41og2 判为阳性，≤31og2 判为阴性）；≥51og2判为阳性。
【注意事项】 ①影响血凝和血凝抑制试验的因素很多，应严格控制试验条件。每加一份试剂或样品后需更换吸头，同时应严格控制作用温度和时间。②准确配制红细胞悬液，使用时应随时振摇。③用pH值7～7。2的磷酸盐缓冲液作为稀释液。④抗原和阴性、阳性血清若有污染应废弃。⑤准确配制4HAU抗原，使用前需进行滴定，滴定好的抗原应在2小时内用完。⑥抗原和血清按规定方法保存。冻干试剂应按规定的体积用磷酸盐缓冲液溶解，溶解后置于2℃～8℃条件下保存不得超过1个月，可分装成小包装，在…70℃条件下冻存，随用随取，但切忌反复冻融。⑦鸭、鹅以及哺乳动物的血清一般需进行非特异性凝集和抑制素的处理。⑧同一亚型不同毒株的血凝抑制试验抗原，若抗原性存在差异，则检测同一血清的血凝抑制效价不同。⑨剩余的试剂及空瓶不能随意丢弃，须经加热或消毒灭菌后方可废弃。
【贮藏与有效期】 血清在…15℃以下条件下保存，有效期为24个月。抗原在4℃条件下保存，有效期为12个月。
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三、鸡白痢、鸡伤寒多价染色平板抗原与阳性血清（）
【制备方法】 本抗原系用标准型和变异型鸡白痢、鸡伤寒沙门氏菌各1株，分别接种于适宜培养基培养，培养物用含2％甲醛溶液的磷酸盐缓冲盐水制成菌液，用乙醇处理，加结晶紫乙醇溶液和甘油制成。用于诊断鸡白痢和鸡伤寒。阳性血清系用标准型和变异型鸡白痢、鸡伤寒沙门氏菌制成的灭活抗原，分别免疫健康羊或家兔，采血提取血清，用国家标准血清标化后，经冷冻真空干燥制成，供全血平板凝集试验对照用。
【物理性状】 本品为紫色的混悬液体，静置后菌体下沉，经振荡后呈均匀的悬浮液。将本品滴于平板，2分钟内不应有自凝颗粒出现。
【无菌检验】 依法检验，应无菌生长。
【抗原效价测定】 在平板上分两处各滴抗原1滴，每滴为0。05毫升。然后分别滴上标准型血清和变异型血清各0。05毫升（均含0。5单位），混合后在2分钟之内出现不低于50％凝集者为合格。
【非特异性检验】 在平板上滴抗原1滴，然后再滴阴性血清1滴，混合后不应出现凝集。
【作用与用途】 供诊断鸡白痢、鸡伤寒用，适用于产蛋母鸡及3月龄以上的鸡。
【用法与判定】 用滴管吸取抗原，垂直滴于玻板上1滴（相当于0。05毫升），然后用针刺破鸡的肱静脉或冠尖，取血液0。05毫升与抗原混合均匀，并涂散至直径约2厘米的液面，2分钟内判定结果。发生50％（＋＋）以上凝集者为阳性，不发生凝集者为阴性，介于上述两者之间则判为可疑。
【注意事项】 ①同时应设强阳性、弱阳性、阴性血清3个对照（各1滴），分别滴加抗原1滴，混匀，在2分钟内，强阳性血清应出现100％凝集，弱阳性血清出现50％凝集，阴性血清不凝集。②平板凝集试验应在20℃以上环境中进行。
【贮藏与有效期】 在2℃～8℃条件下保存，冻干血清有效期为4年，稀释好的强阳性血清和弱阳性血清有效期为1 年。在…15℃以下条件下保存，冻干血清有效期为8年。
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四、鸡败血支原体血清平板凝集试验抗原与阴性、阳性血清（Ⅱ）（）
【主要成分】 本品用抗原性良好的鸡败血支原体制成。
【物理性状】 本品为红色均匀悬浮液体，静置后菌体下沉，振荡后呈均匀悬液，无凝集块或颗粒。
【作用与用途】 用于诊断鸡败血支原体感染。
【用法与判定】 用22号针头在洁净检测板上滴加2滴抗原（约0。025毫升），然后取等量血清与之混合均匀，并涂散成直径约2厘米的液面，2分钟内判定结果。出现明显凝集颗粒或凝集块者为阳性，不出现凝集者为阴性，介于两者之间则判为可疑。
【注意事项】 ①用前将抗原振荡混匀，待检血清不能冻结。②试验应在20℃左右条件中进行。③试验所用的一切材料应保持清洁无污染。
【贮藏与有效期】 在2℃～8℃条件下保存，有效期为3年。阳性血清在2℃～8℃条件下保存，有效期为2年6个月。
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五、禽流感病毒7亚型血凝抑制试验抗原与阴性、阳性血清（）
【主要成分】 抗原为灭活的 H7 亚型禽流感病毒，血凝效价≥7log2。阳性血清为SPF鸡感染禽流感病毒H5亚型制备的高免血清，血凝抑制效价≥7log2。阴性血清为SPF鸡血清。
【物理性状】 抗原为白色或淡黄色海绵状疏松团块，阳性血清和阴性血�