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（3） 透析袋用应及时洗涤、 处理，以便重复使用。注意节约。
三、 免疫球蛋白的纯化
（一） 离子交换柱的制备
1、 20g DEAE…纤维素（whatman DE 32）浸泡于200ml 0。5NHCL；0。5小时，中间搅动两次。
2、 用蒸馏水反复抽洗，直至PH接近D。W。的PH值。
3、 用200ML 0。5N NaOH浸泡15分钟，中间搅动两次。
4、 抽去液体。
5、 将湿胶再用功200ml 0。5NaOH悬浮，浸泡15分钟，然后抽去液体。
6、 重复步骤5
7、 将湿胶再用D。W。反复抽洗 ，直至抽出液PH值接近D。W。的PH值。
8、 再用起始缓冲液反复冲洗，直至抽出液的PH值勤和导电值与起始缓冲相同。
9、 在装柱前，去除微细颗粒。柱底填一些玻璃棉，上面再放置一层Washed sand或glass beads以防cellulose流出柱。
10、 用缓冲液淋洗，使柱床稳定（2。0 ×30cm）流速1…3 ml/分钟或20滴/分钟。
（二） 纯化免疫球蛋白
1、 将脱盐后的粗蛋白对离子交换柱加样。注意每克DRAE…纤维素能受的蛋白质为了30—50g。
2、 梯度洗脱（0…300M NaCL）；用自动部分收集器分管收集，每管5ml。起始液为PBS（0。01M PB；0。01M NaCL；PH6。8）或（0。01M Tris—HCL PH6。8）。
3、 测定蛋白测量，分装…20℃冻存
4、 此法提取的主要是IgG ；但可能会混有β…球蛋白。每毫升血清或腹水可提得Ig3…10mg
5、 若需进一步提纯，可过Sephacryls…300柱层析
（86…123）缺
（三） 凝胶再生的方法
1、 洗脱出第一蜂后，用2N NaCL淋洗至基线稳定，再用起始缓冲液抽洗至洗出液的电导值与缓冲液相同，重新装柱使用。
2、 如再生胶暂不使用，应加防腐剂，置4℃保存，下次装柱应抽洗去除防腐剂。
成功范例：羊抗鼠IgG，各种单抗、猪、鸡、小鼠等血清中IgG。
四、 亲和层析一步法提纯IgG
1、 每5ml湿胶（1。5g干粉）可以经合100—125mg IgG。
2、 血清或腹水或杂交瘤培养上清加样后，以PBS充分洗涤，至记录仪基线稳定。
注意：直接使用腹水，可能会因纤维蛋白而阻断亲和力。
3、 以0。1N甘氨酸—HC L，PH2。5作为洗脱液；注意在PH2。5不稳定的抗体；应考虑用较高PH 进行洗脱。
4、 迅速以1M Tris—HCL PH8。0中和洗脱的提纯Ig（亦可透析中和）。柱再生。
5、 以下步骤同前。
成功范例：提纯兔抗鼠IgG。
附一、 不同IgG亚类与SPA结合与洗脱的条件
IgG亚类
来源
结合
洗脱
IgG1
IgG24
IgG24
IgG9
小鼠
小鼠
小鼠
小鼠 PH》8。0
PH》7。0
PH》7。0
PH》7。0 PH